酶聯免疫分析儀是一種在臨床檢驗和生物醫學研究中廣泛使用的分析儀器,主要用于酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。其基本工作原理如下:
1.抗原 -抗體反應原理
-在ELISA試驗中,首先將已知的抗原或抗體固定于固相載體(如聚苯乙烯微孔板)上。當加入含有相應抗體或抗原的樣本時,樣本中的抗體或抗原會與固相載體上的抗原或抗體特異性結合,形成抗原 -抗體復合物。這種特異性結合是基于抗原和抗體之間的互補性,就像鑰匙和鎖一樣,只有特定的抗原和抗體才能相互匹配結合。
2.酶標記與底物反應原理
-然后,加入帶有酶標記的抗體或酶標記的抗原。這些酶標記物會與之前形成的抗原 -抗體復合物中的相應成分結合。例如,在雙抗體夾心法ELISA中,待測抗原先與固相抗體結合,再與酶標抗體結合。
-加入酶的底物。酶會催化底物發生化學反應,產生有色產物。例如,辣根過氧化物酶(HRP)常用的底物是鄰苯二胺(OPD)或四甲基聯苯胺(TMB)。HRP可以催化底物氧化,生成有色的產物,顏色的深淺與樣本中抗原或抗體的含量成正比。
3.光學檢測原理
-酶聯免疫分析儀通過光學系統來檢測反應產生的有色產物的吸光度。儀器中的光源(通常是鹵鎢燈)發出光線,經過一系列光學元件(如濾光片、光柵等)后,變成特定波長的單色光照射到反應孔上。反應孔中的有色產物會吸收部分光線,未被吸收的光線則透過反應孔被光電探測器(如光電管或光電二極管)接收。
-根據朗伯 -比爾定律,吸光度與溶液中有色物質的濃度成正比。儀器通過測量吸光度,就可以間接計算出樣本中抗原或抗體的含量。