雙孔熒光計是一種基于熒光免疫分析技術的精密儀器,廣泛應用于生物化學、分子生物學、環境監測等多個領域,某些物質受特定波長(激發波長)的紫外光照射后,會發射出比激發波長長的熒光。這些物質可分為內源性和外源性兩類,前者如葉綠素、NADH等,后者如熒光色素、熒光染料等。
雙孔熒光計的結構特點:
1.光源系統:通常采用高強度的LED或激光作為光源,能夠提供穩定且強烈的激發光。光源的波長可以根據實驗需求進行選擇,以匹配不同熒光物質的激發波長。
2.激發和發射單色器:用于選擇特定的激發波長和發射波長。激發單色器將光源發出的復色光分解成單色光,而發射單色器則負責選擇并檢測樣品發射的特定波長的熒光。
3.樣品室:樣品室用于放置待測樣品,通常采用石英池等透明材料制成,以確保光線能夠順利透過樣品。
4.檢測系統:包括光電倍增管或其他高靈敏度的檢測器,用于捕捉并轉換熒光信號為電信號,隨后由數據處理系統進行分析和量化。
5.雙孔設計:有兩個獨立的樣品孔,可以同時對兩個不同的樣品進行熒光檢測,提高了工作效率。同時,雙孔設計還可以減少因樣品更換或操作不當而引入的誤差。
雙孔熒光計的測定步驟:
-接通電源,打開主機開關,等待儀器自檢完成。
-根據說明書要求啟動計算機,并打開熒光分光光度計軟件。
-讓儀器預熱一段時間,以確保光源穩定(如氙燈需預熱約30分鐘)。
-在開始測量前,進行激發校準和發射校準,確保波長的準確性。
-可以使用已知濃度的標準溶液進行校準,以建立標準曲線。
-準備好待測樣品,并確保其符合測試要求(如無氣泡、無雜質等)。
-如果需要,對待測樣品進行適當的處理,如稀釋或濃縮。
-根據實驗要求設置熒光激發波長和發射波長。
-選擇合適的狹縫寬度、PM增益、響應時間等參數,以優化測量結果。
-將樣品放入樣品池中,并調整樣品池位置,確保其位于光路的正確位置。
-開始測量,記錄熒光強度數據。
-如果需要,可以重復測量多次以提高準確性。
-對測量得到的熒光強度數據進行分析,如繪制激發光譜、發射光譜或差譜等。
-根據分析結果得出結論。